紫外分光光度计是由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示系统五大部分组成。
1.光源:
是提供符合要求的入射光的装置,有热辐射光源和气体放电光源两类。热辐射光源用于可见光区,一般为钨灯和卤钨灯,波长范围是350~1000nm;气体放电光源用于紫外光区,一般为氢灯和氘灯,连续波长范围是190~400nm。
2.单色器:
单色器是分光光度计的核心,它是将来自于光源的复合光分解为可调的单色光的一种光学装置,直接影响入射光的单色性,从而影响测定的灵敏度、选择性及准确性。主要组成部件有:
①入射狭缝(限制杂散光进人);
②准光器(透镜或凹面反射镜使入射光变成平行光);
③色散元件(是核心元件,包括棱镜或光栅,可将混合光分解为单色光);
④聚焦元件;
⑤出射狭缝。
在单色器中,色散元件是核心元件,由棱镜或光栅组成。
由于不同波长的光折射率不同,棱镜能将通过的光波根据不同的波长分开。玻璃棱镜色散力强,对紫外线吸收力强,多用于可见分光光度计;石英棱镜工作波长范围为185~4000 nm,不仅在紫外-可见分光光度计中使用,也适用于近红外区。棱镜对光波的色散是非线性的,分辨率较低,波长精确度较差。
光栅是一种十分重要、应用范围很广的色散元件,可以用于紫外-可见、荧光、近红外分光光度计。有透射光栅和反射光栅,实际应用的都是反射光栅,它又可分为平面反射光栅(即通称的反射光栅或闪烁光栅)和凹面反射光栅两类,凹面反射光栅可以起色散元件和准直镜两个作用,使色散后的光束聚焦于出射狭缝,得到锐线光谱。光栅对光波的色散近似线性,分辨率较高,波长精度较高。
3.吸收池:
又称比色皿,供盛放试液进行吸光度测量之用,其底及两侧为毛玻璃,另两面为光学透光面,为减少光的反射损失,吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。根据材质可分为玻璃池和石英池两种,前者用于可见光光区测定,后者用于紫外光区。
4.检测器:
检测器是利用光电效应将透过吸收池的光信号转变成电信号的元件,现今多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
光电管由一个半圆柱形阴极和一个丝阳极组成,封装在真空透明密封套里。阴极的凹面上涂有一层光电发射材料,光照射这种物质后可发射电子,当在两极间加有电位时,发射出来的电子就流向丝阳极而产生光电流。对于相同的辐射强度,它所产生的电流约为光电池所产生电流的1/4。由于光电管具有很高的电阻,所以产生的电流容易放大。用锑、铯做阴极的紫敏光电管,适用范围为200~625 nm;用银、氧化铯作阴极的红敏光电管;适用范围为625~1000 nm。
光电倍增管原理与光电管相似,结构上有差异,但比普通的光电管优越,它可将第一次发射出的电子数目放大到数百万倍。当电子打在兼性阳极上时,能引起更多的电子从表面射出,这些射出的电子又被第二个兼性阳极所吸引,同样再产生更多的电子。具有增益范围宽、响应快的优点,缺点是噪声大,波长相应范围窄(截止波长为900 nm)。
5.信号显示系统:是将检测器输出的信号放大,并显示出来的装置。
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